요약본 발명은 섬유아세포주 유래의 세포외 기질 매트릭스를 가교결합하여 물성을 조절한, 가교결합된 세포외 기질 매트릭스 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 또한, 상기 가교결합된 세포외 기질 매트릭스를 이용하여 인간 배아줄기세포를 배양하는 방법을 제공한다. 본 발명을 통해 제조된 세포외 기질 매트릭스는 가교결합하지 않은 것에 비해 강도가 증가될 수 있고, 인간 배아줄기세포를 배양할 때 미분화 상태가 유지되면서 세포 증식을 유도할 수 있다. 또한, 동일 기질을 사용하여 인간 배아줄기세포를 배양할 수 있는 기간이 현저히 증가하여 세포 배양시 소요되는 비용 및 시간을 절감할 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법으로 제조된 가교결합된 섬유아세포 유래 세포외 기질 매트릭스는, 인간 배아줄기세포의 배양에 효과적으로 사용할 수 있다.